En biología molecular, un marco de lectura es una de las posibles formas en que se puede dividir una secuencia de nucleótidos de ADN o ARN para formar un grupo de tripletes consecutivos no solapados. Cada uno de estos tripletes resulta equivalente a un aminoácido o señal de terminación durante la traducción, se lo llama codón.
Una molécula de ácido nucleico de cadena simple posee un extremo fosfato, llamado extremo 5' (se lee extremo cinco prima) y un extremo hidroxilo, llamado extremo 3'. Estos extremos definen la dirección 5'→3'. Hay tres posibles marcos de lectura en los cuales se puede leer una secuencia de nucleótidos en la dirección 5'→3'. Cada uno de estos marcos de lectura comienza en un nucleótido diferente de un mismo triplete. En un ácido nucleico de doble cadena, existen también tres marcos de lectura adicionales correspondientes a la cadena complementaria, pero en sentido antiparalelo. Ya que las dos cadenas de un ácido nucleico de doble cadena son antiparalelas, la dirección 5'→3' de la segunda cadena corresponde a la dirección 3'→5' de la primera cadena.[1][2]
Por lo general, hay a lo sumo, un único marco de lectura biológicamente relevante para una determinada sección de un ácido nucleico, sin embargo los transcriptos virales pueden ser traducidos utilizando múltiples marcos de lectura.[3]