Enzim restriksi atau endonuklease restriksi adalah enzim yang memotong molekul DNA.[1] Enzim ini memotong DNA pada rangka gula-fosfat tanpa merusak basa.[1] Enzim retriksi mengenali sekuen pendek dan khas dari nukleotida tertentu dan memotongnya pada posisi tertentu. Enzim-enzim yang mampu menggunting DNA suatu makhluk tersebut mampu memotong tempat-tempat serupa dalam molekul DNA dari makhluk yang berkaitan. [2]Setiap enzim mempunyai sekuens pengenalan yang unik pada utas DNA, biasanya sepanjang 4-6 pasang basa.[3]