Negara Kota Vatikan adalah sebuah kebudayaan penting sendiri. Bangunan-bangunan semacam Basilika Santo Petrus dan Kapel Sistina adalah tempat dari karya-karya seni paling terkenal di dunia, yang meliputi karya-karya dari seniman seperti Sandro Botticelli, Gian Lorenzo Bernini dan Michelangelo. Perpustakaan Vatikan dan koleksi Museum Vatikan menyimpan berbagai warisan yang memiliki nilai sejarah, pengetahuan dan kebudayaan yang sangat tinggi. Pada tahun 1984, Vatikan dimasukkan oleh UNESCO ke dalam daftar Situs Bersejarah Dunia (World Heritage Sites). Inilah satu-satunya situs yang mencakup seluruh wilayah sebuah negara.
Vatikan bisa disebut sebagai penjaga de facto Bahasa Latin lewat yayasannya Latinitas Foundation. Sebuah hasil penting dari yayasan ini adalah edisi kamus Latin yang diterbitkan secara teratur yang mencantumkan kata-kata baru, yakni Lexicon recentis Latinitatis.
Populasi tetap Kota Vatikan sebagian besar adalah pria, walaupun dua ordo/tarekat rohaniwati tinggal di Vatikan. Sebagian kecil diantaranya adalah rohaniwan Katolik senior; sisanya adalah para anggota dari berbagai ordo/tarekat religius. Banyak pekerja dan pegawai kedutaan besar bagi Vatikan tinggal di luar tembok (batas negara) Vatikan.
Turisme dan ziarah merupakan unsur utama dalam kehidupan sehari-hari Vatikan. Sri Paus mengadakan pertemuan publik mingguan dan merayakan misa publik dan kebaktian-kebaktian lainnya, dan memberikan berkat resmi kepada "Kota dan Dunia" (Urbi et Orbi) pada Hari Paskah dan Hari Natal, dan pada beberapa saat setelah terpilihnya dirinya menjadi Sri Paus. Untuk beberapa upcara penting dengan jumlah peserta yang besar, Sri Paus memimpin perayaan misa terbuka di Lapangan Santo Petrus.