De nachtbus is een bus die 's nachts rijdt, voornamelijk om mensen die laat uit geweest zijn ('stappers') naar huis te brengen. Nachtbussen rijden na de laatste rit van de gewone dienstregeling.
Nachtbussen rijden niet dezelfde routes als de bus, tram of metro overdag. Omdat er minder nachtlijnen zijn, worden meerdere gebieden met een nachtlijn bediend.
In de grotere steden rijden vaak 'stadsnachtbussen' en vanaf de kleinere steden rijden soms 'streeknachtbussen'. In de meeste steden en regio's rijden de nachtbussen alleen op vrijdag- en zaterdagavond. Doordeweekse nachtbussen zijn vaak beperkt tot een of twee ritten vlak na middernacht of vroeg in de ochtend.